大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中大鼠褪黑素（MT）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷

實(shi)驗原理(li)

試劑盒采用(yong)(yong)雙抗(kang)體(ti)(ti)一步夾心法(fa)酶聯(lian)免(mian)疫吸附(fu)試驗（ELISA）。往預先包被(bei)大鼠褪(tun)黑(hei)素（MT）捕獲抗(kang)體(ti)(ti)的(de)包被(bei)微孔中，依(yi)次加入標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記的(de)檢測抗(kang)體(ti)(ti)，經過溫育(yu)并*洗(xi)滌。用(yong)(yong)底物(wu)(wu)TMB顯色(se)(se)，TMB在過氧化(hua)物(wu)(wu)酶的(de)催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色(se)(se)，并在酸的(de)作用(yong)(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成終的(de)黃(huang)色(se)(se)。顏色(se)(se)的(de)深淺和(he)樣品中的(de)大鼠褪(tun)黑(hei)素（MT）呈正相關。用(yong)(yong)酶標(biao)儀在450nm 波長下(xia)測定(ding)吸光度（OD 值），計算(suan)樣品濃(nong)度。

樣本處理及(ji)要求

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注(zhu)：標本(ben)溶血會影響(xiang)后檢測結(jie)果，因此溶血標本(ben)不宜(yi)進行此項檢測。

需(xu)要而(er)未提供(gong)的試(shi)劑和器材

• 酶標儀（450nm）

• 高精度加樣器及(ji)槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

• 37℃恒溫箱

• 蒸餾水或去離(li)子水

試劑(ji)盒組成

大鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒備注：

1.  標準品濃度(du)依次為：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL

2.  經(jing)過(guo)大(da)量正常(chang)標(biao)(biao)本檢驗，標(biao)(biao)本的正常(chang)濃度值(zhi)均在試(shi)劑盒提供的檢測(ce)范圍內，實(shi)驗過(guo)程(cheng)中直接取50μL樣本上樣即可。當(dang)(dang)有部分樣本值(zhi)超過(guo)zui大(da)標(biao)(biao)準(zhun)品濃度時，可用樣本稀釋液將標(biao)(biao)本進(jin)行(xing)適當(dang)(dang)稀釋后再進(jin)行(xing)實(shi)驗。

注意(yi)事項(xiang)

• 嚴格(ge)按(an)照規定的時(shi)間和溫度進行溫育以保證準確結果。所(suo)有試劑(ji)都必須在使用(yong)前達到(dao)室溫20-25℃。使用(yong)后立(li)即(ji)冷藏保存試劑(ji)。

• 洗板不(bu)正(zheng)確(que)(que)可以導致不(bu)準確(que)(que)的結果。在加入底物前確(que)(que)保(bao)盡(jin)量吸干(gan)孔內液體。溫育過程中不(bu)要讓微孔干(gan)燥掉。

• 消除(chu)板(ban)底殘留(liu)的液體和手(shou)指(zhi)印，否(fou)則(ze)影響OD值(zhi)。

• 底(di)物顯色液應呈(cheng)無(wu)色或很(hen)淺的顏(yan)色，已經變藍的底(di)物液不能使用。

• 避免試劑和標(biao)本的交叉污染以免造成錯誤結果。

• 在儲存和溫育時避免強光直接照(zhao)射。

• 平(ping)衡至(zhi)室溫后再打(da)開密(mi)封(feng)袋(dai)以防水滴(di)凝聚在冷板條(tiao)上。

• 任何反(fan)應(ying)試(shi)(shi)劑不能(neng)接(jie)觸漂(piao)白溶劑或漂(piao)白溶劑所(suo)散發(fa)的(de)強烈氣(qi)體。任何漂(piao)白成(cheng)分都(dou)會(hui)破壞(huai)試(shi)(shi)劑盒中反(fan)應(ying)試(shi)(shi)劑的(de)生物活性。

• 不能使(shi)用過期產品(pin)。

• 如(ru)果(guo)可能(neng)傳播疾病，所有的(de)樣品(pin)都應管理好，按(an)照規(gui)定的(de)程(cheng)序處理樣品(pin)和檢測裝置。

試劑(ji)準備

試劑(ji)盒(he)從冷藏(zang)環境中取出應在室溫平衡(heng)后方可使用。

20×洗滌(di)緩沖液的稀釋(shi)：蒸餾水(shui)(shui)按(an)1：20稀釋(shi)，即1份(fen)20×洗滌(di)緩沖液加19份(fen)蒸餾水(shui)(shui)。

操作步驟

1.  從室溫(wen)平衡20min后的(de)鋁箔袋中取出(chu)所需(xu)板條，剩余板條用自封(feng)(feng)袋密封(feng)(feng)放回4℃。

2.  設置(zhi)標(biao)準(zhun)品孔和樣(yang)本(ben)孔，標(biao)準(zhun)品孔各加不(bu)同濃度的標(biao)準(zhun)品50μL；

3.  樣(yang)本孔中加(jia)(jia)入(ru)待測樣(yang)本50μL；空白(bai)孔不(bu)加(jia)(jia)。

4.  除空白孔(kong)(kong)外(wai)，標準(zhun)品孔(kong)(kong)和樣本孔(kong)(kong)中每孔(kong)(kong)加入(ru)辣根過氧化物(wu)酶(mei)（HRP）標記的檢測(ce)抗體100μL，用(yong)封(feng)板膜封(feng)住反應孔(kong)(kong)，37℃水(shui)浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去(qu)液(ye)體，吸水紙(zhi)上(shang)拍(pai)干，每孔加滿洗(xi)(xi)滌(di)液(ye)（350μL），靜置1min，甩去(qu)洗(xi)(xi)滌(di)液(ye)，吸水紙(zhi)上(shang)拍(pai)干，如此重復(fu)洗(xi)(xi)板5次（也可(ke)用洗(xi)(xi)板機洗(xi)(xi)板）。

6.  每孔加入底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每(mei)孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處(chu)測定各孔的OD值。

實驗結果計算(suan)

以所測標(biao)(biao)(biao)準(zhun)品(pin)的(de)(de)(de)OD值為(wei)橫坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)(biao)，標(biao)(biao)(biao)準(zhun)品(pin)的(de)(de)(de)濃度(du)值為(wei)縱坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)(biao)，在坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)(biao)紙上(shang)或用相關軟件繪制標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線，并得(de)到直(zhi)線回歸方程(cheng)，將樣(yang)品(pin)的(de)(de)(de)OD值代入方程(cheng)，計(ji)算出(chu)樣(yang)品(pin)的(de)(de)(de)濃度(du)。

試劑盒性能(neng)

• 檢(jian)測范圍：2.5 pg/mL – 80 pg/mL。

• 靈敏度：低檢測濃(nong)度小于(yu)0.1 pg/mL。

• 特異性：不(bu)與其(qi)它(ta)可溶(rong)性結(jie)構類(lei)似物交叉(cha)反應。

• 重(zhong)復性(xing)：板(ban)內變異(yi)系數小于10% ，板(ban)間變異(yi)系數小于15% 。

說(shuo)明

由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提(ti)供的所有原料進行全面的鑒定(ding)與分析(xi)，本(ben)產品可能存在一(yi)定(ding)的質量(liang)技術風險。

• 終的(de)實(shi)驗結(jie)果與試劑的(de)有(you)效性、實(shi)驗者的(de)相關操作(zuo)以(yi)及當時的(de)實(shi)驗環境(jing)密切相關，請務必準備充足(zu)的(de)標本備份。

• 不同批(pi)次的(de)同一產品可能會有少許差(cha)別，如(ru)：檢測限(xian)、靈敏度以及顯色(se)時間等，請依據試劑(ji)盒內說(shuo)明(ming)書進行實驗操作(zuo)，網站電(dian)子版說(shuo)明(ming)書僅作(zuo)參考。

• 只有全部使用本試劑盒配套試劑才(cai)能(neng)保證(zheng)檢測效果(guo)，不能(neng)混用其他商的產(chan)品。只有嚴格遵(zun)守本試劑盒的實驗說明才(cai)會得(de)到*的檢測結果(guo)。

• 本(ben)(ben)公司(si)只對試(shi)劑盒本(ben)(ben)身負責，不對因使(shi)用該試(shi)劑盒所造成的(de)(de)樣本(ben)(ben)消耗負責，請使(shi)用者使(shi)用前(qian)充(chong)分考慮(lv)到樣本(ben)(ben)的(de)(de)可(ke)能使(shi)用量，預(yu)留充(chong)足的(de)(de)樣本(ben)(ben)。

• 使用化(hua)學裂解(jie)液制備的組織勻漿或(huo)細胞提取(qu)液可能會(hui)由(you)于某些(xie)化(hua)學物質的引入導致ELISA實(shi)驗結(jie)果偏(pian)差。

• 若樣(yang)本(ben)為細(xi)胞(bao)培(pei)養上清，因(yin)該類樣(yang)本(ben)干擾(rao)因(yin)素(su)較多，如：細(xi)胞(bao)狀態(tai)、細(xi)胞(bao)數量、采樣(yang)時間等(deng)，所以可能存在(zai)檢(jian)測不出的情況。

• 某(mou)些天然(ran)蛋(dan)(dan)白(bai)或重組蛋(dan)(dan)白(bai)，包括原核(he)及真核(he)重組蛋(dan)(dan)白(bai)，可能因(yin)為(wei)與(yu)本產品所使(shi)用的檢(jian)測抗(kang)體及捕獲抗(kang)體不匹配，而不被檢(jian)測出。